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shRNA表达载体构建

(ECS000021) shRNA表达载体构建,北京shRNA表达载体构建
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  • 商品名称:shRNA表达载体构建
  • 商品编号:ECS000021
  • 品牌:赢润生物
  • 上架时间:2014-09-17

shRNA表达载体构建

服务简介:

作为RNA干扰实验的第一步,靶位点的选择以及相应的shRNA表达载体的构建,是整个RNA干扰实验的重中之重。靶位点选择恰当,shRNA干扰效率高,整个RNA干扰实验就能够事半功倍,否则,就会做许多无用功。

目前,有许多免费软件或网站能够提供靶位点选择及shRNA序列设计,但是这种免费软件算法落后,设计出的shRNA序列有效率只有25%-30% 左右。与之相对应的是一些商业化软件,或者现成的商业化shRNA库,由于其算法先进、设计原则合理,其提供的shRNA序列的有效率通常能达到75%以 上,即可以达到每四条shRNA中有三条有效。所以,如果采用商业化软件来设计shRNA,或者直接购买现成的商业化shRNA库,将能使您在整个RNA 干扰实验之始便占得先机。

基于以上,赢润生物在国内率先引进代表RNA干扰领域全球顶尖水准的TRC (The RNAi, RNA干扰协会)开发的TRC shRNA库。该库针对人、小鼠、大鼠等数万个基因,每个基因提供3-5 条shRNA (己构建至载体上) ,总数达五万多条,且数量还在不断增加。经过大规模实验验证,其中超过75%均为有效shRNA ,其干扰效率均大于70%.

以此shRNA库为基础,针对每个基因,我们可为您提供3-5条高质量的shRNA序列,并为您构建到sRNA真核表达载体上。由于此数据库中的 shRNA序列有效性超过75% ,即理论上来说,每一套shRNA克隆中,必定至少有一条shRNA的干扰效率超过70% 。所以,您再也不必担心选择的shRNA序列没有干扰效果,您再也不用费时费力费心地去一遍遍地筛选有效的shRNA序列。选用此shRNA库,您会发 现,原来RNA干扰实验会如此简单!

您只需告诉我们您需要干扰的目的基因,我们就会为您从数据库中调取相应的shRNA序列信息,然后,您可以选择合适的shRNA达系统来表达shRNA ,进行RNA干扰实验。

TIPS : TRC及TRC shRNA库

TRC (The RNAi ,RNAA干扰协会)是由麻省理工学院和哈佛大学牵头建立的合作机构,包括Massachusetts General Hospital 、Harvard Med school 、Dana Farber Cancer Inst 、The Broad Institute 、Whitehead lnstitute 、MlT、Academica Sinica (Taiwan)和另外5个国际性组织,代表着RNA干扰领域的全球最顶尖水平。该组织计划在3年内构建数量达15000个人类基因和15000个小鼠基 因的shRNA文库。第1版的TRC shRNA文库包括35000 shRNA克隆(其中人类基因有5300个,小鼠基因有2200个) ,其它新构建的克隆每个季度会陆续公布。

赢润生物shRNA表达系统

TRC shRNA克隆套装中的原装进口质粒,由于不带荧光标记,使得质粒转染细胞后,无法确定转染效率。针对这一不足,赢润生物将自己的shRNA表达系统与 TRC shRNA库相结合,为客户提供更贴心、更灵活,且RNA干扰效率丝毫不减的shRNA表达质粒产品。也就是说, shRNA序列依然参考TRC shRNA库中的数据,而承载这些shRNA片段的载体,则采用多种启动子、多种荧光标记可供选择的赢润生物shRNA表达系统。

本公司目前提供的shRNA真核表达载体,共有hU6 、mU6 、hH1, h7SK四种pol Ⅲ型启动子可供选择,可选择携带荧光(包括绿色荧光、红色荧光)或不携带荧光。除此之外,本公司还提供mirshRNA真核表达载体,可以进行 mirshRNA真核表达载体构建。

构建的shRNA真核表达载体,既可以当作普通的shRNA表达载体使用,也可以用来包装腺病毒、慢病毒或腺相关病毒。如果您的目的细胞质粒转染效 率较高(建议大于70%) ,则您可以直接使用带有目的shRNA的pYr系列质粒进行RNA干扰实验。而如果您的目的细胞质粒转染效率较低,则可直接以这些载体为基础,包装腺病 毒、慢病毒或腺相关病毒,然后再用病毒感染目的细胞。利用病毒的高感染效率、高表达效率,更好地进行RNA干扰研究实验。

既可以当普通的shRNA真核表达载体使用,同时又可以拿来包装腺病毒、慢病毒或腺相关病毒,花一份钱,买两样东西!而且其干扰有效性、干扰效率大 部分都超过70%!这么超值、这么优秀、性价比如此高的shRNA产品,您还等什么呢?赶紧拨打我们的电话,或者通过QQ 、Email联系我们吧,您只需报上目的基因的NCBI序列号, 后面的事,我们替您完成!

赢润生物shRNA表达载体列表

载体名称

启动子

荧光标记

真核筛选标记

是否可包病毒

pYr-1.1

hU6

EGFP

Neo

pYr-1.2

mU6

EGFP

Neo

pYr-1.3

h7SK

EGFP

Neo

pYr-1.4

hH1

EGFP

Neo

pYr-2.1

hU6

Neo

pYr-2.2

mU6

Neo

pYr-2.3

h7SK

Neo

pYr-2.4

hH1

Neo

pYr-3.1

hU6

EGFP

Neo

pYr-mir30-shRNA

CMV

EGFP

Neo

pYr-LVX-shRNA1

hU6

Puro

pYr-LVX-shRNA2

hU6

ZsGreen1

pYr-LVX-shRNA3

hU6

EGFP

Puro

pYr-AAV-shRNA1

hU6

ZsGreen1

pYr-AAV-shRNA2

hU6

tdTomato

图2. 1 赢润生物shRNA表达载体pYr-1. 1 质粒图谱

选用赢润生物shRNA表达系统,具有如下优点:

  1. shRNA序列数据来自国外成熟shRNA数据库,质量有保证。RNA干扰效率的高低主要取决于靶位点的选择和shRNA序列的设计,由于本公司所采用的shRNA序列来自国外成熟shRNA数据库,算法先进,靶位点成功率高,所以shRNA的干扰成功率非常高;

  2. 您可以选择构建一条或者多条,灵活性高;

  3. 多种启动子,有荧光或无荧光,绿色荧光或红色荧光等可自由选择,以更好地配合后续实验;

  4. 载体可作为普通shRNA表达载体使用,亦可作为病毒包装系统的穿梭载体或表达载体使用,以进行腺病毒、慢病毒或腺相关病毒包装。

服务价格及周期:

服务项目

服务价格(元)

服务周期

shRNA 表达载体构建

1500/条

2-3周

NC 对照

500(三条以上免费赠送)

现货

转染级质粒大提( 100ug )

400/个

1周

测序

免费

1周

客户须知:

  1. 请事先确定是否需要荧光;

  2. 您可以订购赢润生物shRNA克隆套装(己装载至载体的三条shRNA 、NC对照质粒) ,仅需4000元;

  3. 由于小提质粒在转染细胞时,无论是浓度、纯度还是内毒素含量均不是很合格,所以本公司建议您订购一个"转染级质粒大提"服务,400元/个,至少 提供转染级大提质粒100ug.如果您订购赢润生物shRNA克隆套装,且将套装中的4个质粒均做大提,则大提费用可优惠至250元/个。

服务承诺:

  1. 本公司承诺,如客户订购针对某个基因的赢润生物shRNA克隆套装(3-5条shRNA), 则本公司保证其中至少有一条shRNA是有效的,其干扰效率大于70% 。在目的细胞转染效率大于80% ,且客户检测shRNA有效性的实验方法恰当、操作正确的前提下,如果没有达到上述标准,本公司将免费为客户重新设计和构建两条shRNA 。如果五条shRNA都无效,则本公司将全额退还客户己付款项;

  2. 如果shRNA序列由客户自己设计,本公司只负责成功构建shRNA表达载体,对其中shRNA的干扰有效性不做任何保证;

  3. 如果客户订购的shRNA条数在三条以下,本公司不保证设计的shRNA一定有效;

  4. 如果客户需委托本公司完成shRNA的有效性验证实验,则需加收验证部分的实验费用


服务承诺
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